Bonjour, je suis actuellement bloqué sur une démonstration de la localisation des protéines (si elles sont transmembranaires ou périphériques) il est marqué dans mon cours :
"Exemple de démonstration basée sur l'utilisation des fantômes de globules rouges : après l'éclatement des membranes dans une solution hypotonique, en fonction du milieu dans le quel on met les membranes, on peut obtenir différents types de structures, fantômes ou vésicules, vésicules dites à l'endroit (dans la même disposition que la membrane cytoplasmique) ou vésicule
retournée ou à l'envers.
On met les deux types de vésicules en présence d'un réactif cavalent, soluble dans l'eau, mais qui ne traversera pas les membranes, ce réactif étant marqué par la radioactivité. On solubilise
les membranes dans un détergent et on sépare les protéines sur un gel de polyacrilamide-SDS puis on détecte les protéines par autoradiographie sur gel.
Exemple de résultat : avec les vésicules à l'endroit on n'observe qu'une bande, avec les vésicules à l'envers, on détecte deux bandes, dont l'une est identique à celle du premier gel.
Conclusion on a détecté une protéine transmembranaire et une protéine périphérique ou intrinsèque mais insérée seulement du coté intracytoplasmqique." Pr N. Boehm : Faculté de médecine strasbourg.
Le liens du cours avec les illustration (Bas de page 5) :
http://www.google.fr/url?sa=t&rct=j&...51156542,d.ZGU
Bon voici mon problèmes :
Je comprends le principe de l'expérience mais pas son interprétation. Comment peut on savoir si la protéines est transmembranaire ou périphérique car pour comparer les deux vésicules il
faudrait qu'elles soit identique. Non ? j'ai bien compris qu'ils compare les même protéines par éléctrophorèse je suppose. Mais sur une vésicule la protéine pourrait être sur la face extracellulaire et sur l'autre vésicules la protéine pourrait être sur la face intracellulaire. Ou alors ils cherchent des protéines dont ils savent qu'elle sont que sur une face ? Mais ça n'a pas de sens de chercher des protéines que l'on à déjà localiser..
:mit:
"Exemple de démonstration basée sur l'utilisation des fantômes de globules rouges : après l'éclatement des membranes dans une solution hypotonique, en fonction du milieu dans le quel on met les membranes, on peut obtenir différents types de structures, fantômes ou vésicules, vésicules dites à l'endroit (dans la même disposition que la membrane cytoplasmique) ou vésicule
retournée ou à l'envers.
On met les deux types de vésicules en présence d'un réactif cavalent, soluble dans l'eau, mais qui ne traversera pas les membranes, ce réactif étant marqué par la radioactivité. On solubilise
les membranes dans un détergent et on sépare les protéines sur un gel de polyacrilamide-SDS puis on détecte les protéines par autoradiographie sur gel.
Exemple de résultat : avec les vésicules à l'endroit on n'observe qu'une bande, avec les vésicules à l'envers, on détecte deux bandes, dont l'une est identique à celle du premier gel.
Conclusion on a détecté une protéine transmembranaire et une protéine périphérique ou intrinsèque mais insérée seulement du coté intracytoplasmqique." Pr N. Boehm : Faculté de médecine strasbourg.
Le liens du cours avec les illustration (Bas de page 5) :
http://www.google.fr/url?sa=t&rct=j&...51156542,d.ZGU
Bon voici mon problèmes :
Je comprends le principe de l'expérience mais pas son interprétation. Comment peut on savoir si la protéines est transmembranaire ou périphérique car pour comparer les deux vésicules il
faudrait qu'elles soit identique. Non ? j'ai bien compris qu'ils compare les même protéines par éléctrophorèse je suppose. Mais sur une vésicule la protéine pourrait être sur la face extracellulaire et sur l'autre vésicules la protéine pourrait être sur la face intracellulaire. Ou alors ils cherchent des protéines dont ils savent qu'elle sont que sur une face ? Mais ça n'a pas de sens de chercher des protéines que l'on à déjà localiser..
:mit:
via Forum FS Generation http://forums.futura-sciences.com/biologie/612177-mise-evidence-de-proteines-membranaires.html
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