Bonjour à tous,
J'ai une petite question à vous soumettre.
J'ai commandé un gène dans un plasmide avec les site de restriction qui vont bien de chaque côté et comme j'ai beaucoup de chance, il se trouve que le vecteur qu'il m'ont envoyé contient également ce fameux site de restriction :???:. Je me retrouve du coup avec 3 bandes au lieu de 2 sur mon gel après digestion.
Et c'est là que ça devient drôle (ou pas): bande 1 de 1680pb, mon gène de 1389pb, bande 3 de 1217pb. Du coup c'est un peu la galère d'extraire la bande du milieu de mon gel...
On arrive enfin à ma question: comment je pourrai faire pour améliorer la discrimination de mes bandes sur mon gel? J'ai testé de passer de 1% d'agarose à 0.8%, c'est un peu mieux mais pas mirobolant. Des idées? Sachant que je fait migrer 5min à 70V puis 25/30min à 150V. Si je diminue le voltage, ça sera mieux?
Merci d'avance!
J'ai une petite question à vous soumettre.
J'ai commandé un gène dans un plasmide avec les site de restriction qui vont bien de chaque côté et comme j'ai beaucoup de chance, il se trouve que le vecteur qu'il m'ont envoyé contient également ce fameux site de restriction :???:. Je me retrouve du coup avec 3 bandes au lieu de 2 sur mon gel après digestion.
Et c'est là que ça devient drôle (ou pas): bande 1 de 1680pb, mon gène de 1389pb, bande 3 de 1217pb. Du coup c'est un peu la galère d'extraire la bande du milieu de mon gel...
On arrive enfin à ma question: comment je pourrai faire pour améliorer la discrimination de mes bandes sur mon gel? J'ai testé de passer de 1% d'agarose à 0.8%, c'est un peu mieux mais pas mirobolant. Des idées? Sachant que je fait migrer 5min à 70V puis 25/30min à 150V. Si je diminue le voltage, ça sera mieux?
Merci d'avance!
via Forum FS Generation http://forums.futura-sciences.com/biologie/609776-meilleure-resolution-gel-dagarose.html
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